蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒說(shuō)明書(shū) 
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒描述： 蛋白質(zhì)羰基是由氨基酸殘基側鏈中的氨基或亞氨基受到自由基攻擊后轉變而來(lái)，在體內主要通過(guò)
金屬離子催化氧化系統形成，是多種氨基酸在蛋白質(zhì)氧化修飾過(guò)程中的早期標志。羰基化蛋白極易相
互交聯(lián)、聚集為大分子從而降低或失去原有蛋白質(zhì)的功能，其含量能夠反應蛋白質(zhì)氧化損傷的程度，
可作為衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標。
蛋白質(zhì)羰基能夠與 2,4-二硝基苯肼反應生成紅色 2,4-二硝基苯腙沉淀，產(chǎn)物在 370 nm 處具有特
征吸收峰，通過(guò)吸光值的變化即可定量檢測蛋白質(zhì)羰基的含量。
需自備試劑：乙酸乙酯（C4H8O2，MW=88.10，CAS: 141-78-6）；無(wú)水乙醇（C2H6O，MW=46.07，CAS: 64-17-5）
測定過(guò)程中所需要的儀器和試劑：紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研缽
/勻漿器、可調式移液器、臺式離心機、恒溫水浴/培養箱、乙酸乙酯、無(wú)水乙醇和蒸餾水。
①組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液 A 體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱(chēng)取 0.1 g 組織，
加入 1 mL 提取液 A）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 5000 rpm 離心 10 min，取全部上清至離心管中，加
入 0.1 mL 提取液 B，室溫靜置 10 min，4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清即為待測樣本，置于冰上
待測。 ②細菌或細胞：離心收集細菌或細胞至離心管內，按照細菌或細胞數量（104 個(gè)）：提取液 A 體積
（mL）為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細菌或細胞加入 1 mL 提取液 A）處理樣品，冰浴超聲
破碎（功率 300 W，超聲 3 s，間隔 7 s，總時(shí)間 3 min），4℃ 12000 rpm 離心 10 min，取上清即為待測
樣本，置于冰上待測。 ③血清、培養液等液體樣本：直接測定或適當稀釋后再進(jìn)行測定。
測定步驟： ①分光光度計/酶標儀預熱 30 min 以上，調節波長(cháng)至 370 nm，試劑五調零。 ②在離心管中依次加入下列試劑（避光條件下進(jìn)行） 
吸光值測定：取 200 μL 反應液于 96 孔板或微量石英比色皿，測定 370 nm 處吸光值，記為 A 測
定和 A 對照，計算 ΔA 測定=A 測定-A 對照。注：每個(gè)樣品均需設一個(gè)對照組
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)含量計算： 
注釋?zhuān)篤S5：反應體系中加入試劑五的體積，0.3 mL；V1：組織樣品提取后總體積，1.1 mL；V2：
細菌或細胞樣本提取后總體積，1 mL；V 樣：反應體系中加入待測樣本的體積，0.06 mL；ε：蛋白質(zhì)
羰基消光系數，22 mL/μmol/cm；d：96 孔 UV 板光徑，0.5 cm；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣
品質(zhì)量，g；細菌或細胞數量：以萬(wàn)計。 
注意事項： ①提取液 B 應根據使用量現用現配，配置后置于 4℃保存，若變?yōu)楹谏珓t停止使用； ②試劑一見(jiàn)光易分解，反應過(guò)程需在避光條件下進(jìn)行； ③試劑四為沉淀洗滌液，需重復加入三次對沉淀進(jìn)行洗滌； ④為保證結果準確且避免試劑損失，測定前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)（以實(shí)際收到說(shuō)明書(shū)內容為準），
確認試劑儲存和準備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預期差異較大的樣本進(jìn)行預測定，
過(guò)程中問(wèn)題請您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。
蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒
文章來(lái)源：http://www.jslxxb.cn/newss-181.html |
400-788-2680
