elisa法廣泛用于乙肝兩對半檢測。但elias試劑盒檢測中影響因素較多，有時(shí)可見(jiàn)到一些假陽(yáng)性或假陰性，本文檢驗君就ELISA測定乙肝兩對半的影響因素及對策做如下討論: 
1、樣本采集與處理的影響 （1）標本嚴溶血及混有紅細胞的血清易沉淀或附著(zhù)在聚乙烯孔內不易洗凈，殘留在孔內的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽(yáng)性，嚴重溶血標本禁用。 （2）采血試管洗滌不徹底、反復使用易交叉污染；塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內會(huì )使樣本內抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標本，肝素抗凝血漿會(huì )增加OD值，可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過(guò)氧化物酶活性。 （3）標本凝固不全，正常血液采集后1/2~2h開(kāi)始凝固，18~24h完全血塊完全收縮。在工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開(kāi)始凝固時(shí)即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過(guò)程中可以形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結果；因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當的促凝劑。
2、試劑的影響 （1）乙肝兩對半試劑廠(chǎng)家較多；不同廠(chǎng)家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，不同廠(chǎng)家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%—99.3%,78~89%存在較大差異。有的廠(chǎng)家酶標板孔間A值差大于15%；標記酶的活性及顯色液的穩定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導致結果的假陽(yáng)性或假陰性。因此。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結果準確的關(guān)鍵之一。 （2）不同方法學(xué)的檢測試劑，會(huì )使兩對半結果出現一些不同。例如：在實(shí)際工作中常用ELISA檢測HBsAg結果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測為陽(yáng)性。除方法學(xué)的靈敏度外；還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標志物檢測存在差異，建議試劑廠(chǎng)家對劑的制備應該考慮亞型及型濃度的問(wèn)題。
3、操作技術(shù)的影響 （1）加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準確性，直接影響檢測結果。由于吸嘴構造特殊，導致清洗困難，加大了交叉污染的機會(huì )。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗，定期校準。 （2）溫浴影響，96孔酶標板結構特別；易產(chǎn)生邊緣效應，抗原抗體結合及酶促反應對溫度有嚴格要求，酶標板周?chē)c內部孔升降溫速率不同，造成周邊與內部孔結果差異；干浴與水浴存在明顯的差異，盡可能使用水浴，并要求固相板放入水中，減少受熱不均，貼密封膜，防止污物浸入。
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