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小鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒 |
品牌:原鑫生物
貨號:YX-137924
規格:48T/96T
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小鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒 檢測原理 小鼠三磷酸腺苷(ATP)ELISA試劑盒檢測原理基于競爭法ELISA。該方法通過(guò)加入已知濃度的ATP酶標抗原和待測樣本中的ATP,與固定在微孔板上的ATP特異性抗體進(jìn)行競爭結合。樣本中ATP濃度越高,則與抗體結合的酶標抗原越少,反之亦然。經(jīng)過(guò)一系列洗滌步驟后,加入酶標二抗與酶標抗原結合,最后加入顯色底物進(jìn)行顯色反應。顯色程度與樣本中ATP濃度成反比,通過(guò)測定吸光度值,可計算出樣本中ATP的濃度。
檢測步驟詳解 1. 試劑準備:將試劑盒中的試劑按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行準備,包括酶標抗原、抗體、酶標二抗、顯色底物等。 2. 樣本處理:根據實(shí)驗需要,對小鼠樣本進(jìn)行適當處理,如離心、稀釋等,以去除干擾物質(zhì)并調整樣本濃度。 3. 加樣:將處理好的樣本和已知濃度的ATP酶標抗原分別加入微孔板中,每個(gè)樣本設置多個(gè)復孔以保證結果的準確性。 4. 孵育:將微孔板置于恒溫箱中,進(jìn)行一定時(shí)間的孵育,使抗原與抗體充分結合。 5. 洗滌:孵育結束后,用洗滌液洗滌微孔板,去除未結合的抗原和抗體,以減少非特異性反應。 6. 加酶標二抗:洗滌后,向微孔板中加入酶標二抗,與酶標抗原結合形成抗原-抗體-酶標二抗復合物。 7. 再次孵育:將微孔板再次置于恒溫箱中,進(jìn)行一定時(shí)間的孵育,使酶標二抗與抗原-抗體復合物充分結合。 8. 洗滌:再次洗滌微孔板,去除未結合的酶標二抗。 9. 加顯色底物:向微孔板中加入顯色底物,與酶標二抗中的酶發(fā)生反應,產(chǎn)生顏色變化。 10. 終止反應:當顏色變化達到一定程度時(shí),加入終止液終止顯色反應。 11. 測定吸光度值:使用酶標儀測定微孔板中各孔的吸光度值,記錄數據并進(jìn)行分析。
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